Metoda 1: Metoda ekstrakcji (metoda stosowana obecnie w moim kraju; zapewnia niższą czystość, ale oferuje niższe koszty produkcji).
Ekstrakcja roztworu oksytocyny: Weź 100 g suszonego proszku z tylnego płata przysadki mózgowej i 30 g proszku kwarcowego, umieść je w młynie kulowym i dodaj wodę destylowaną. Wykonaj ekstrakcję cztery razy, stosując tę samą procedurę. Objętości wody destylowanej dodawanej na każdym etapie są następujące: 1,4 l dla pierwszych dwóch ekstrakcji i 1,3 l dla kolejnych dwóch. Każdą ekstrakcję prowadzi się przez 45 minut, po czym następuje wirowanie w celu zebrania cieczy; pozostałą pozostałość poddaje się następnie dalszej ekstrakcji. Cztery powstałe ekstrakty łączy się, otrzymując roztwór oksytocyny. Podsumowując: Suszony proszek tylnego przysadki mózgowej [woda, młyn kulowy] → Ekstrakt oksytocyny → Rozdział chromatograficzny.
Weź 1500 g-obrobionego wstępnie syntetycznego zeolitu, dodaj 20 l 0,25% roztworu kwasu octowego i-po wymieszaniu-wlej mieszaninę do kolumny jonowymiennej-. Gdy poziom roztworu kwasu octowego obniży się do poziomu 2–3 cm nad powierzchnią złoża zeolitu, należy natychmiast wprowadzić ekstrakt oksytocyny. Utrzymuj odpowiednią szybkość przepływu i zbieraj powstały biały, mętny eluat (frakcja ta zawiera głównie oksytocynę; ponieważ oksytocyna ma punkt izoelektryczny [pI] 7,7-, podczas gdy wazopresyna ma pI 10,9-wazopresyna łatwo tworzy jony dodatnie i w ten sposób jest adsorbowana na kolumnie). Gdy tylko poziom cieczy ekstraktu opadnie na powierzchnię złoża zeolitu, należy natychmiast dodać wodę destylowaną i kontynuować zbieranie mętnego eluatu aż do ustania przepływu. Doprowadzić pH zebranego mętnego eluatu do 3,5 za pomocą lodowatego kwasu octowego. Szybko podgrzej roztwór w łaźni wodnej do 95 stopni, utrzymuj tę temperaturę przez 3 minuty, następnie szybko schłodź roztwór i wstaw do lodówki na noc. Podsumowując: Ekstrakt oksytocyny [HAc, kolumna zeolitu syntetycznego] → Mętny eluat [HAc, ogrzewanie] → Roztwór rozdzielony → Adsorpcja i elucja. Następnego dnia przefiltruj schłodzony roztwór. Do przesączu, mieszając, dodać 10% zawiesinę bentonitu (dodając 3 ml zawiesiny na 100 ml przesączu). Kontynuuj mieszanie przez 1 godzinę, aby ułatwić adsorpcję, następnie odwiruj mieszaninę. Przetestować płynny supernatant za pomocą roztworu odczynnika kwasu sulfosalicylowego; brak osadu wskazuje, że proces adsorpcji został zakończony. Jeżeli adsorpcja jest niepełna, powtórzyć proces obróbki bentonitu; następnie połączyć osady bentonitu otrzymane z obu etapów adsorpcji. Bentonit eluuje się czterokrotnie 1% kwasem octowym (odpowiednio objętości 1,6 l, 1,4 l, 1,2 l i 0,8 l). Do każdego eluatu dodaje się trichlorek *tert*-butylu po ogrzaniu roztworu do 80 stopni; następnie temperaturę podnosi się do 95 stopni, szybko schładza do 25 stopni i filtruje lub odwirowuje. Cztery powstałe przesącze łączy się w celu określenia siły działania i granicy wazopresyny. Przebieg procesu jest następujący: Roztwór chłodzony [filtracja] → Filtrat [zawiesina bentonitu] → Adsorbat [1% HAc] → Eluat. Przygotowanie zastrzyku oksytocyny:
Oznaczony roztwór oksytocyny, spełniający standardy jakości, rozcieńcza się do stężenia 5 U/ml lub 10 U/ml. Następnie filtruje się go przez lejek ze spiekanego szkła No. 4 lub No{4}}, napełnia ampułki i sterylizuje przepływającą parą wodną w temperaturze 100 stopni przez 30 minut, aby uzyskać produkt końcowy. Przebieg procesu jest następujący: Roztwór oksytocyny (zatwierdzony test) [filtracja, napełnianie, sterylizacja] → Wstrzyknięcie oksytocyny.
Regeneracja zeolitu syntetycznego: Zeolit syntetyczny przemywa się dwukrotnie wodą destylowaną. Następnie dodaje się 1,5 l wody (w przeliczeniu na 500 g zeolitu) i 150 g chlorku sodu i mieszaninę miesza się przez 2 godziny w celu wypłukania i usunięcia wazopresyny. Następnie zeolit przemywa się wodą destylowaną, aż nie pozostaną już jony chlorkowe. Dodaje się odpowiednią ilość wody i doprowadza się pH do 9 za pomocą wodorotlenku sodu; mieszaninę miesza się przez 30 minut, po czym zlewa się supernatant. Zeolit przemywa się wodą destylowaną, pH doprowadza do 5,5–6 za pomocą kwasu siarkowego i ponownie przemywa wodą do stanu prawie neutralnego. Następnie jest filtrowany w celu usunięcia nadmiaru wody i suszony w temperaturze 105 stopni do wykorzystania w przyszłości. Przed użyciem dodaje się odpowiednią ilość wody i reguluje pH lodowatym kwasem octowym, mieszając, aby umożliwić namoczenie. Przygotowanie 10% zawiesiny bentonitu: Bentonit i wodę miesza się w stosunku masowym-do-objętościowym 1:10. Mieszaninę miele się przez około 1 godzinę, w tym czasie dodaje się kwas octowy w celu utrzymania stabilnego pH 3,5. Powstałą zawiesinę przechowuje się następnie w lodówce do wykorzystania w przyszłości. Metoda 2: Synteza chemiczna. Najpierw syntetyzuje się amid heptapeptydu (segmenty 3–9), wychodząc z estru benzyloksykarbonylo-leucyny *p*-nitrofenylu; następnie syntezowany jest azydek benzyloksykarbonylo-S-benzylocysteiny-tyrozyny (segmenty 1–2); a w trzecim etapie syntetyzowana jest oksytocyna.